罗氏蛋白酶K使用注意事项

罗氏蛋白酶K（Proteinase K）是一种用途广泛的非特异性Serine Proteinase，具有多种重要特性和广泛应用。

一、产品特性

1.pH稳定性：罗氏蛋白酶K在较宽的pH范围内（4-12，甚至到12.5）均有活性，这使得它在多种实验条件下都能保持稳定的性能。

2.稳定性：该酶在SDS（十二烷基硫酸钠）、尿素或EDTA等存在时亦很稳定，这些变性剂甚至能刺激其活性，如SDS可使蛋白酶K的活性增加七倍。

3.切割特异性：罗氏蛋白酶K是一种无明显切割特异性的内肽酶，能够切割氨基酸X和Y（X=脂族、芳族或疏水氨基酸，Y=任何氨基酸）之间的肽键。

4.纯度与活性：罗氏蛋白酶K经过纯化，去除了RNA酶和DNA酶活性，确保了其在核酸分离过程中的纯净性。其活性通常较高，如某些产品规格中提到的活性大于30U/mg。

二、应用领域

1.核酸提取：罗氏蛋白酶K常用于提取mRNA、基因组DNA，或用于从各种细胞中提纯DNA和RNA时消化杂蛋白。通过消化包围靶DNA的蛋白质，罗氏蛋白酶K能够增加探针与靶核酸结合的机会，从而增强杂交信号。

2.蛋白质结构研究：该酶还可用于糖蛋白的修饰以及蛋白质结构研究等方面。

3.原位杂交技术：在原位杂交技术中，罗氏蛋白酶K通常用于杂交前的处理，以消化包围靶DNA的蛋白质，提高杂交信号。但需注意控制其浓度和消化时间，以避免对细胞结构造成破坏。

4.其他应用：罗氏蛋白酶K还可用于菌落转移准备过程中去除细胞碎片，以及处理组织切片以确保在原位杂交过程中实现有效的探针浸润。

三、使用注意事项

1.浓度控制：使用罗氏蛋白酶K时，要注意控制其浓度。过高或过低的浓度都可能对实验结果产生不利影响，如破坏细胞结构、导致核消失等。

2.孵育条件：孵育温度和时间也是影响罗氏蛋白酶K活性的重要因素。一般推荐孵育温度为55至65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟至48小时，理想孵育时间为2小时。

3.储存条件：罗氏蛋白酶K应保存在-20℃冰箱里，避免反复冻融，以保证其有效性和稳定性。

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